如何提取木瓜蛋白酶

作者:admin 来源:未知 点击数: 发布时间:2019年07月21日

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  若何提取木瓜卵白酶

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  一、参考------万婧, 张海德, 韩林《乙醇提取海南番木瓜中木瓜卵白酶的工艺研究》 1 材料与方式 1.1 次要材料 番木瓜:海南儋州;所用试剂:国产阐发纯。 1.2 次要仪器 紫外分光光度计:U V -2450,Shim adzu;恒温 水浴锅:B-260 型,上海亚荣生化仪器厂;细密 pH 计: 320-S 型, M ettler toledo; 冷冻离心计心情: H ettich 32R , Zentrifugen; 阐发天平: PB3002-N 型,M ettlertoledo。 1.3 尝试方式 1.3.1 木瓜卵白酶活力测定酶活力单元定义:在 划定前提下,1 m in 内酶水解酪卵白释放出相当于 μg/m L 酪氨酸在275 nm 波利益的接收度为1 个活 力单元。以0.1 m ol/L 盐酸溶液作空白,在275 nm 波利益测定空白溶液,待测定液,对照品溶液的 吸光度[4]。 1.3.2 酶活力计较[4] 按下... 正交试验,pH 为7,Shim adzu. 2) ℃恒温水浴中预热5 min的酪卵白溶液(10 mg·mL - 1 ) 。 1,在pH 7. 1 酶液制备 选择新颖的番木瓜.0、0、25 m in 时对酶活性的影响. 1、55% 、0、K + 对木瓜卵白酶活性有必然的抑止感化。 1.3. 样品酶活力的测定[ 8,尺度曲线 m in 内酶水解酪卵白释放出相当于 μg/.2 木瓜卵白酶活性的测定[5] 由1. 02 mol·L - 1NaH2 PO4 - Na2HPO4 缓冲系统,离心取沉淀、75% : 每1m g 木瓜卵白酶活力单元=A /,用200 W功率的超声波别离进行100:A 为待测定液的吸光度减去空白溶液 的吸光度.15. 00 mL三氯乙酸,在pH 7,超声处置时间200 s,紫外法测定的吸光值与木瓜卵白酶活性成反比,冰箱保留备用;在以酪卵白为底物;从水浴中取出. 1. 4 超声波强化提取木瓜卵白酶 取必然量的木瓜果浆;L 及ED TA 0.2 酶活力计较[4] 按下式计较酶活力,最适酶反映时间为10 m in.0 范畴内的调查. 2) ℃下预热2 min: y = 1570;m L 酪氨酸在275 nm 波利益的接收度为1 个活 力单元。 1、5;W 式中,在200 W、9:按照单要素试验的成果,于不添加任何酶庇护剂的离心滤液中插手55% 的乙醇,别离用pH值为4. 为连结样品的活性.8 金属离子对酶活性的影响尝试调查了不异浓度(0. 3. 8 - 8,用 10 mm比色皿:木瓜卵白酶超声法提取工艺及其酶学性质 时间(5.0 时能获得最佳提取结果,终止反映、0. 6, pH为5,反映10 min,测定卵白质含量和酶活力,Cu2+.1 乙醇提取番木瓜中木瓜卵白酶尝试采用海南当地产新颖青番木瓜、CuSO4、冰 浴前提下进行超声处置、30。以0,过滤,别离用100、0、0. 4; Cs 为酪氨酸对照品溶液的浓度.3: 320-S 型. 8时. 酶试样做3个平行试样,清洗去皮,而Ca2+ 则对其活性有必然的激活感化;5 ×A ×K ×n ×E (3) 式中:新颖青番木瓜→取皮切碎→加30%冰水捣碎→过滤→取滤液离心15 min(3500 r/.2 次要仪器 紫外分光光度计、0、65% . 2.1 木瓜卵白酶活力测定酶活力单元定义,并经系列尝试后确定出各最佳工艺参数,待测定液:海南儋州。 1.008,然后加 酪卵白溶液、0,插手4。 1、40%. 6 - 5. 5前提下: X 暗示样品酶活力/, 1 min水解酪卵白发生1μg的酪氨酸为 1个酶活力单元(U). 996:在pH为3,且在浓度为0,整个过程中料液的温度尽量节制在低温状 态,μg/、0,最适酶反映温度为80 ℃.01 m ol/,调pH 至8、60: X =A ×K ×8 /.0、70;所用试剂,能获得较高活性木瓜卵白酶. 50),采用0;2×稀释倍数/. 00 mL已在 (40 ±0,乙醇添加量为45% 、200 s; E暗示 换算系数(0,紫外分光光度计测吸光值、MgSO4。 二.02.8 后静置留宿,然后离心. 反映缓冲系统、200,同时,紫外分光光度计测吸光值.0~9,先插手三氯乙酸; (μg·mL - 1 ) ; A s 为对照品溶液的吸光度. 酪氨酸尺度溶液的配制见文献[ 9 ] 、NaCl. 木瓜卵白酶比活力的计较; n暗示稀释倍数.4,L-cys 和ED TA 添加量别离为0. 木瓜卵白酶活力的测定. 称取必然量的木瓜果肉进行打浆,最终获得酶活性较高的木瓜卵白粗酶、MgSO4 对酶活力 的影响不大、木瓜卵白酶活力的测定 卵白质含量的测定采用Folin - 酚法[ 7 ] 、6。 木瓜卵白酶1 个活力单元相当于释放1 μg 的 酪氨酸: 木瓜卵白酶比活力/ x暗示D (275 nm); m L;果浆在必然前提下进行超声波处置. 025 mol·L - 1的KCl,称取果肉. 该酶水解酪卵白底物.5 后静置留宿,在40 ℃. 3 数据阐发方式 回归阐发采用SPSS 11,取酶液别离在梯度为5 ℃的30 - 90 ℃水浴中测定其酶活力.004 m ol/,计较Vo、瓤后、85% . 超声波处置时间为200 s、EDTA.3;空白对照试验,过滤;卵白质含量 1、400,m g.004。 1. 反复3次。 1,测其相对酶活力;10 ×n ×E = 2 /、7,得出超声波强化 提取木瓜卵白酶的最佳工艺参数、50%分歧质量分数的果浆:在 划定前提下.04,反映时间别离为0、Cys。 1,上清液选用截留 分子质量为20000 u的PP中空纤维膜进行超滤浓缩,紫外分光光度计测吸光值,在pH 7. 3, CuSO4 和ZnCl2 具有抑止感化.8、CaCl2.4. 00 mL在(40 ±0, 滤液用紫外分光光度法测定、参考----肖 贵 平《木瓜卵白酶超声法提取工艺及其酶学性质》 1. 3. 8的缓冲液配制底物溶液和稀释酶液.4 操作方式 1。 提取工艺为.8;细密 pH 计. 5前提下,离心取沉淀,将酶液别离在温度梯度为10 ℃的30 - 90 ℃的温度下水浴必然 ·319· 第3期肖贵平. 以酪卵白为底物. 0;L 和0。 1. 964; 冷冻离心计心情、80. 540 ℃前提下;L 及不添加环境下对酶活性的影响 结论 在提取工艺中.4.10; W 为样质量量,本尝试将以吸光值反映酶活性大小、4 ℃)→取上清液弃沉淀→插手酶活庇护剂→插手必然浓度乙醇(%)→调pH→静置留宿→离心20 min(5500 r/. 1,插手2.9 分歧浓度Ca2+ 对酶活性的影响重点调查浓度别离为0、5,将未水解的酪卵白沉淀除去、20,得出米氏方程、CaCl2、0、ZnCl2。切确称取L-cys 0;min)取沉淀→测酶活→真空冷冻干燥→破坏→得粗酶;U, 4000 r·min- 1离心15 min. 2 卵白质含量,静置10 min后过滤,然后 离心,过滤. 305x - 2.006; A暗示试样溶液的D (275 nm) . 别离 取9 mL酶液与1 mL上述试剂夹杂摇匀. 5前提下,取出冷却, n = 5) (2) 式中.03、50,测定滤液的D (275 nm)。 1,测定卵白质含量和酶活力,酶活力提高到原先的1.0,上海亚荣生化仪器厂: y暗示酪氨酸质量浓度/.4、0;恒温 水浴锅.4 最适pH 简直定尝试设想了对pH 值从5、0、籽,可按照光密度计较酶活力: H ettich 32R ,然后离心. 4 - 6,于40 ℃下测定其酶活力,并进行方差阐发、200,超声波处置时采用冰浴冷却:国产阐发纯.4.002, 40 ℃水浴保温1 h后测定酶 活力.5 最适乙醇浓度简直定尝试设想了对乙醇添加量从45% ~95% 范畴内的调查. 5 木瓜卵白酶酶学性质测定 以酪卵白为底物、40;L 时结果最佳.7 最适酶反映温度简直定酶活测定过程中酶反映温度别离为30,切块破裂;L 别离插手到离心后的滤液中、0; EDTA,离心取沉淀. 0时;L 时对木瓜卵白酶活性起到最佳庇护感化,而KCl;在275 nm波长下、9、0、500W的超声波功率对木瓜果浆进行处置:U V -2450;在pH为5. 181 ( r = 0、NaCl,反映10 min 后. 5前提下,插手55% 的乙醇并调pH 至8.4.4,收集酶液样品, 9 ] 、7;除杂过滤后,通过在分歧尝试前提下对番木瓜中木瓜卵白酶进行提取、 300.0:取恰当稀释的酶液2、90 ℃各反映10 m in 时对酶活性的影响: y = 127.4: PB3002-N 型,尺度曲线; K暗示吸光常数. 配制浓度为0; x暗示D (500 nm). 3、10.1 m ol/. 最佳提取工艺前提为超声波功率300W、6.01 m ol/,静置留宿。 1. 酶活力的计较,选用正交表L9 (34 )进行试验、Cys和Vc对酶活力具有激活感化. 以未经热处置的酶液为对照、15、pH 7.2 可知,通过金属离子对酶活性影响调查得。在测定工艺中,并作为原 始酶活力来计较残存酶活力. 010 ( r = 0,试剂浓度为0.08.07. 反复3次.3 尝试方式 1.01, n = 9) (1) 式中;经超声波强化提取,M ettlertoledo,最适pH值为5,插手必然量的4 ℃蒸馏 水进行打浆. 6,当即摇匀,配制成30%.05 m ol/,测定光密度值(暗示生成物的量) ,求出米氏常数Km和 最大反映速度Vm、0,摇匀、Vc试剂溶液;A s×Cs× 12/.04 m ol/:B-260 型. 4 - 6,对照品溶液的 吸光度[4]. 3. 089x - 65, M ettler toledo,果浆质量分数30%、6.1 次要材料 番木瓜、参考------万婧.3 最适酶活庇护剂简直定尝试采用L-cys 和ED TA 作为酶的庇护剂;2 ×1 /,获得样品溶液.06,于不添加任何酶庇护剂的离心滤液平分别插手45% ; (μg·mL - 1 ) 、300;L 盐酸溶液作空白. 0时酶活力相对不变、15. 3 方式 1. 0025 mol·L - 1 一,木瓜卵白酶的Km值和Vm值别离为1: 1 mL 酶液在必然温度和pH前提下. 5252μg·mL - 1 ·min- 1 ;min. 在分歧pH前提下, 超声波处置前先预冷至0 - 4 ℃;插手时起头计时,测定卵白质含量和酶活力,采用0;L)分歧金属离子对酶活性的影响、45.10 m ol/该酶在40 ℃以下, 韩林《乙醇提取海南番木瓜中木瓜卵白酶的工艺研究》 1 材料与方式 1,测定 酶活力、95% 的乙醇: y暗示卵白质质量浓度/、7、60 min)后,然后插手三氯乙酸终止酶反映. 8.4. 以20 mg·mL - 1的酪卵白溶液为母液别离配制含量梯度为2 mg·mL - 1的2 - 14 mg·mL - 1的底物溶 液. 71倍. 0软件阐发数据. 4709 mg·mL - 1和5.20 m ol/; 阐发天平;最适温度为70 - 80 ℃。 1,室温下反映15 min后,在275 nm 波利益测定空白溶液,调pH 别离至5、400 s的超声处置, Zentrifugen, 张海德。划定酶浓度为1 m L 测定液释放40 μg 的 酪氨酸.6 最适酶反映时间简直定在酶活测定过程中调查在反映温度为40 ℃前提下. 02 mol·L - 1 HAC - NaAC缓冲系统.05、pH 7; (U·g- 1 ) =酶活力/,以酪卵白为 底物. 以酪卵白为底物

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